在进行ELISA（酶联免疫吸附测定）实验时，当做完实验读板时样本的吸光值（OD值）极低，甚至出现低于空白孔的情况，这一结果可能是由多种原因造成的。

样本吸光值极低，关键在于判断是操作问题、ELISA试剂盒的问题还是样本本身的问题。欣博盛生物为您总结了以下常见的可能原因：

1. 试剂添加遗漏

在操作中漏加生物素化抗体、酶结合物、底物等组分，导致读数时没有读值。

对照说明书检查实验步骤，确认所有试剂都已按照说明书的要求添加。

2. 试剂盒组分未充分回温

ELISA试剂盒中的组分需要在室温下完全解冻和回温才能使用。因此，在实验开始前，需要取出试剂盒平衡至室温后，再开始实验。

3. 孵育温度太低

抗体在适宜的温度下有最佳的结合活性，确保孵育时在正确的温度下进行，孵育箱要设定好适宜的温度并正常工作。

4. 底物不足或变质

底物是产生颜色反应的关键成分，如果底物不足或已变质，则不会有颜色变化。

确保在实验中使用了足量的新鲜配制底物溶液。确保储备液在有效期内并且正确保存，确保试剂按正确的浓度使用。

5. 酶标板包被、封闭问题

出现吸光值（OD值）极低的情况，提示包被原（抗体或抗原）可能未正确固定在微孔板上，或封闭步骤不当，导致非特异性结合，影响结果。

如酶标板由实验人员自行包被与封闭，需检查确认包被原的浓度和包被过程是否正确、封闭液是否合适，封闭时间是否足够。如酶标板为ELISA试剂盒生产商预包被，可联系厂家进行售后。

6. 一抗或二抗失效

出现吸光值（OD值）极低的情况，提示抗体可能已经失去活性，无法结合目标分子。此时可能需要更换新的抗体进行实验。

7. 样本问题

（1）样本中可能不含目标抗原或抗体，或者浓度低于检测限。

检查靶蛋白表达系统，确保它在您的样品中被表达出来。如果靶蛋白的表达水平低，需要尝试浓缩样本，或选择一个更加灵敏的检测方法。确保您使用的是没有超过测定方法检测范围的阳性对照。

（2）样本冻融后蛋白降解、凝集，分布不均。

样本应及时检测，如需低温下长期保存，需做好分装。使用和保存中避免样本反复冻融。

（3）样本可能不适用于ELISA检测方法研究。

样品一般选择培养上清、血清、血浆。其他样品形式可能不适合做 ELISA 检测或者需要优化检测条件，实验前，需要确定试剂盒能够用于样本的检测。

8. 仪器问题：

酶标仪可能需要校准或清洁，或滤光片设置错误。

此时需校准酶标仪，清洁光学部件，检查滤光片设置。

当遇到ELISA实验没有读值的情况时，首先应检查实验操作是否严格按照说明书进行，然后逐项排查上述可能的原因。如果问题依然存在，可能需要重新准备试剂重新进行实验。在排除所有可能的操作原因后，如果问题仍然没有解决，可能需要联系试剂盒的供应商寻求进一步的技术支持。

关于欣博盛生物：

欣博盛生物科技有限公司成立于2007年，是一家力耕于生命科学和生物技术领域的高新技术企业，专门从事以ELISA产品为主的生物试剂研发与销售，致力于为广大研究人员提供高品质的科研产品。

欣博盛研发生产中心拥有完整的酶联免疫检测试剂盒研发和生产平台，研发生产团队由具有近30年免疫检测行业经验的专家带领，由具有生物学、医学、药学、检验学等相关专业和研发经验的人员组成。广泛与欧美知名的抗原抗体生产公司和机构开展合作，筛选和委托定制高质量的原料，采用行业内质量控制标准来研发生产ELISA试剂盒。公司自主研发的ELISA试剂盒在国内众多重点实验室广泛使用，深受广大科研人员的好评。欣博盛品牌 ELISA试剂盒自推出以来已先后在Nature, Cell, PNAS等国际期刊中被引用。

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