在ELISA实验中，研究人员需要进行多次加样步骤完成实验操作。对于常规双抗体夹心法ELISA，一般有如下加样步聚，即加样本、加检测抗体、加酶结合物、加底物（最后加终止液停止反应）。

加样步骤基础知识

加样步骤中一般使用微量加样器（移液器，移液枪），按照实验规定的用量将液体成分加入酶标板孔板中。每次加入新的液体组分前，应更换新的吸头，以免液体组分间发生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加样。部分加样步骤需使用稀释后的液体组分，如标准品需要经复溶倍比稀释后上样，抗体、浓缩酶结合物需稀释为1×工作液，需要按照说明书的稀释要求，预先在试管、EP管等中按规定的稀释度稀释后再加样。

加抗体、酶结合物工作液和底物工作液时，可用定量多道加液器，节省加样的时间和操作，更好地保证孔与孔间的平行，减少因操作带来的误差。

在ELISA中，一般需进行45加样。“45加样”是什么？

45加样，应当为45度加样，即加样枪的吸头所在的直线应当与板条所在的直线呈45度角，吸头贴着孔壁加入。

▶ 吸取样品时，加样枪吸头不应黏附多余的液体；加样时不可90度向孔中滴加液体，因为这样操作会导致液体残留在吸头上，导致加样不准确。

▶ 吸头所在的直线与板条所在的直线所呈角度不可过小，会使液体残留在酶标板孔的孔壁上，导致加样不准确。

▶ 不要将吸头伸入孔底，一方面若接触孔底可能压弯吸头，另一方面吸头浸入液面下容易产生气泡，导致加样不准确。

以上为ELISA实验中加样tips的全部内容，您学会了吗？

如有疑问，可咨询欣博盛生物了解更多详情。

关于欣博盛生物：

欣博盛生物科技有限公司成立于2007年，是一家力耕于生命科学和生物技术领域的高新技术企业，专门从事以ELISA产品为主的生物试剂研发与销售，致力于为广大研究人员提供高品质的科研产品。

欣博盛研发生产中心拥有完整的酶联免疫检测试剂盒研发和生产平台，研发生产团队由具有近30年免疫检测行业经验的专家带领，由具有生物学、医学、药学、检验学等相关专业和研发经验的人员组成。广泛与欧美知名的抗原抗体生产公司和机构开展合作，筛选和委托定制高质量的原料，采用行业内质量控制标准来研发生产ELISA试剂盒。公司自主研发的ELISA试剂盒在国内众多重点实验室广泛使用，深受广大科研人员的好评。欣博盛品牌 ELISA试剂盒自推出以来已先后在Nature, Cell, PNAS等国际期刊中被引用。

欣博盛生物现可提供三百余种不同指标ELISA试剂盒，涵盖各类常用指标，更可提供ELISA定制与代测服务。更多详情，欢迎咨询欣博盛生物！