本篇样本处理方法旨在作为一般参考，具体方案因样本类型而异，需要您根据参考文献并自行验证决定，从而选择更适合自己样本的处理方案。
常见样本
1. 血清
将血液样本收集于无抗凝剂的试管或离心管中，于室温静置30 min以上（具体时间视室温环境决定）或4℃过夜静置至自然凝固，令血清析出。4℃，1000×g离心15-20 min，收集并分装上清液，根据需要取适量上清液用于ELISA测定，其余样品-20℃或-80℃储存备用，并尽量减少冻融循环。
注意事项：
（1） 血液样本采集过程中应避免溶血，采集得到的血清样本应该是淡黄色透明或半透明液体，如果样本呈红色，说明采集过程中出现了溶血现象。红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。
（2） 避免使用高血脂样本。脂质会影响抗原抗体的结合，从而影响测值的准确性。
（3） 应避免细菌污染，因为细菌分泌的酶可能对蛋白产生分解作用，且菌体内可能含有内源性的HRP从而导致检测的假阳性。
（4） 血清样本宜在新鲜时检测；保存过程中如有沉淀生成，应再次离心；样本使用前应缓慢均衡至室温，不应加热使之融解。
2. 血浆
将血液样本收集于含有抗凝剂的试管或离心管中，在采集的30 min内4℃，1000×g离心15-20 min，立即收集并分装上清液，根据需要取适量上清液用于ELISA测定，其余样品-20℃或-80℃储存备用，并尽量减少冻融循环。
注意事项：
（1） 常用的抗凝剂包括EDTA、枸橼酸钠等。样品处理前请仔细阅读ELISA试剂盒说明书，查看选用的试剂盒针对抗凝剂是否有特殊要求。
附表：ELISA样品处理常见抗凝剂特性总结 | |
名称 | 抗凝原理与特点 |
EDTA | 目前使用最多和应用最广泛的抗凝剂。 通过与血液中钙离子结合成螯合物，阻止血液凝固。对血细胞形态、血小板计数影响小，稳定性高。 |
枸橼酸盐（钠盐） | 与血液中钙离子结合成螯合物，阻止血液凝固。 对凝血因子有很好的保护作用，适用面广。血液中溶解度低，抗凝作用较弱。 |
肝素盐（锂，钠，钾盐） | 通过加强抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）灭活丝氨酸蛋白酶，阻止凝血酶的形成，并阻止血小板聚集，从而阻止血液凝固。肝素是红细胞透渗脆性试验的理想抗凝剂。但不适于CBC、细胞形态学检查。 优点抗凝能力强、不影响血细胞体积、不易溶血、能耐高温。缺点是成本高、会引起白细胞聚集。肝素抗凝血应于短时间内使用，否则放置过久血液又可凝固。 |
对于欣博盛ELISA试剂盒，建议避免使用肝素盐作为抗凝剂。
（2） 血液样本采集过程中应避免溶血。
（3） 避免使用高血脂样本。脂质会影响抗原抗体的结合，从而影响测值的准确性。
（4） 保存过程中如有沉淀生成，应再次离心；样本使用前应缓慢均衡至室温，不应加热使之融解。
3. 细胞培养上清
如果目的物是分泌型，即可选择细胞培养上清作为样本。
将细胞培养上清液收集于干净的无菌试管中，4℃，1000×g离心15-20 min，除去细胞碎片和杂质，收集并分装上清液，根据需要取适量上清液用于ELISA测定，其余样品-20℃或-80℃储存备用，并尽量减少冻融循环。
注意事项：
（1）细胞培养上清样本成分复杂，若检测上清液中特定蛋白时，血清中的成分会对ELISA检测结果造成影响。在收集上清前24小时，应改用不完全培养基培养。
（2）细胞样本干扰因素较多， 如细胞状态、细胞数量、酸碱度、培养基盐离子浓度、采样时间等，在样本准备过程中应尽量使铺板时接种细胞数量水平一致、生产状态相当。
（3）保存过程中如有沉淀生成，应再次离心；样本使用前应缓慢均衡至室温，不应加热使之融解。
（4）收集细胞培养上清前建议做支原体检测，避免支原体污染。
4.细胞裂解液
如果目的物主要存在于胞内，建议选择细胞裂解液作为样本类型。实验中选择裂解液作为空白对照。
对于贴壁细胞，吸去培养基，用胰蛋白酶消化细胞，再加入适量的培养基，将细胞冲洗干净（若为悬浮细胞，可省略该步骤），将细胞悬浮液收集于离心管中，1000×g离心5 min收集细胞，用预冷PBS（0.01 mol/L，pH 7.0-7.4）洗涤3次，再加入适量预冷PBS重悬细胞。
物理裂解法：通过超声破碎或反复冻融使细胞破裂，释放内容物；
化学裂解法：通过化学提取液和洗涤剂裂解细胞，如RIPA、TritonX-100、NP-40和SDS、脱氧胆酸钠、β巯基乙醇、DTT等，使细胞破裂，释放内容物。
将裂解好的细胞在4℃，1000×g条件下离心15-20 min，除去细胞碎片和杂质，收集并分装上清液，根据需要取适量上清液用于ELISA测定，其余样品-20℃或-80℃储存备用，并尽量减少冻融循环。
注意事项：
（1）细胞样本干扰因素较多， 如细胞状态、细胞数量、酸碱度、培养基盐离子浓度、采样时间等，在样本准备过程中应尽量使铺板时接种细胞数量水平一致、生产状态相当。
（2）破碎细胞的同时会释放蛋白酶，故需在细胞破碎前加入蛋白酶抑制剂（如PMSF蛋白酶抑制剂）以防止蛋白质水解。
（3）一般情况下物理裂解法优于化学裂解法，化学裂解过程中引入酸或碱，可能对ELISA检测结果造成影响；若化学裂解法中的去污剂成分会干扰抗原抗体反应影响ELISA检测效果，需要除去去污剂成分。
（4）保存过程中如有沉淀生成，应再次离心；样本使用前应缓慢均衡至室温，不应加热使之融解。
（5）收集细胞培养上清前建议做支原体检测，避免支原体污染 。
5. 组织匀浆液
组织样本通常制成组织匀浆，下面是常见的ELISA组织样本处理方法的整理。
使用干净的工具解剖目标组织并尽快置于冰上，以防被蛋白酶降解；取适量的组织块（组织较大需剪碎）于预冷的PBS（0.01 mol/L，pH 7.0-7.4）中清洗去表面残留的血液与冗余组织，称重备用。
加入适量的预冷PBS（PBS的体积取决于组织的重量，5-9 mL PBS适用于1 g组织，建议使用前立即在PBS中加入适量蛋白酶抑制剂），用玻璃匀浆器充分研磨匀浆，有条件的实验室可以使用机器匀浆或超声粉碎。也可采用反复冻融的方式获取组织匀浆液，但次数不可过多，部分酶活力会受影响。
将匀浆液收集于干净的离心管中，4℃，5000×g离心5-10 min，置于冰上，收集并分装上清液，根据需要取适量上清液用于ELISA测定，其余样品-20℃或-80℃储存备用，并尽量减少冻融循环。
注意事项：
（1） 全程需在冰上进行。
（2） 如样品需要长期保存，应添加蛋白酶抑制剂。
（3） 根据实验需要，建议组织匀浆液先定量总量总蛋白。ELISA检测指标众多，组织样本如肝组织、肾组织、脑组织等含有的蛋白复杂，可能会导致检测的假阳性，需要对高浓度的样本进行稀释，判断是否存在假阳性的可能；组织块的大小区别、提取蛋白的效率区别会导致样本间的蛋白含量存在差异，造成后续数据处理的困难，事先定量蛋白以便于统计分析数据。
（4） 保存过程中如有沉淀生成，应再次离心；样本使用前应缓慢均衡至室温，不应加热使之融解。
其他样本
总的来说，因为ELISA只能检测可溶性蛋白的含量，所以样本处理的原则是保证所有样本均为澄清的液体，沉淀或悬浮物都应去除。保存过程中如有沉淀生成，应再次离心；样本使用前应缓慢均衡至室温，不应加热使之融解。样本处理与保存过程中须保证样本不含NaN3，因为NaN3会抑制HRP的活性，从而导致假阴性的结果。
关于更多特殊样品种类的处理方法与细节，您可以通过我们官方网站的文献筛选功能了解使用欣博盛ELISA试剂盒时特殊样品所需的具体处理方法与使用感受，也可以联系我们的技术人员为您提供实验建议。
1.唾液
在唾液样本采集之前，建议受试者不要吃东西、抽烟或喝饮料。用生理盐水彻底漱口后，采集唾液于无菌管中。立即4℃，1000×g条件下离心15-20 min，收集并分装上清液，根据需要取适量上清液用于ELISA测定，其余样品-20℃或-80℃储存备用，并尽量减少冻融循环。
2.痰液
选择痰液中较为粘稠部分称重，加两倍体积于痰量的 0.1% DTT以溶解粘液，用吸管反复吹打，漩涡器振荡15 s，37℃恒温水浴振荡5 min；加入两倍体积于痰量的PBS缓冲液（0.01 mol/L，pH 7.0-7.4）继续振荡15-20 min，用金属网或滤纸过滤，4℃，1000×g条件下离心15-20 min，收集并分装上清液，根据需要取适量上清液用于ELISA测定，其余样品-20℃或-80℃储存备用，并尽量减少冻融循环。
3.尿液
将尿液收集于无菌管中。4℃，1000×g条件下离心15-20 min，收集并分装上清液，根据需要取适量上清液用于ELISA测定，其余样品-20℃或-80℃储存备用，并尽量减少冻融循环。
4.粪便
尽量采集干的粪便，粪便过稀会较难处理且降低检测的准确性。采集的重量应大于50mg，粪便加入预冷PBS振荡（0.01 mol/L，pH 7.0-7.4，PBS的体积取决于组织的重量，5-9 mL PBS适用于1 g组织），将粪便充分研磨匀浆，有条件的实验室可以使用机器匀浆或超声粉碎，4℃，1000×g条件下离心15-20 min，收集并分装上清液，根据需要取适量上清液用于ELISA测定，其余样品-20℃或-80℃储存备用，并尽量减少冻融循环。
5.脑脊液
将脑脊液样本收集于无菌管中，注意采集时避免血液污染；4℃，1000×g条件下离心15-20 min，收集并分装上清液，根据需要取适量上清液用于ELISA测定，其余样品-20℃或-80℃储存备用，并尽量减少冻融循环。
6.肺泡灌洗液
按常规方法进行支气管肺泡灌洗，回收肺泡灌洗液于无菌管中，4℃，1000×g条件下离心15-20 min，收集并分装上清液，根据需要取适量上清液用于ELISA测定，其余样品-20℃或-80℃储存备用，并尽量减少冻融循环。
7.胸腹水
按常规方法进行胸腔穿刺取胸腔积液，收集胸腹水于无菌管中，4℃，1000×g条件下离心15-20 min，收集并分装上清液，根据需要取适量上清液用于ELISA测定，其余样品-20℃或-80℃储存备用，并尽量减少冻融循环。
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