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Neo-Glo® HiBiT Detection Assay Kit (Extracellular)
利用微分裂荧光素酶技术(Nanoluc split enzyme technology)，荧光素酶蛋白分子被拆分为两个片段并分别表达。这两个片段具有高亲和力，在同一反应体系中能够迅速自动结合，形成具有活性的完整酶分子。通过检测微分裂荧光素酶的活性，可以对细胞内目标蛋白的表达水平、相互作用及动态变化进行研究。在反应体系中，分裂荧光素酶的小片段被克隆到表达载体上，并与目标蛋白在同一分子上表达，作为目标蛋白的标签。带有分裂荧光素酶小片段标签的目标蛋白表达载体由用户自行构建、制备，并转染细胞。Neo-Glo® 微分裂荧光素酶检测试剂盒（胞外型）提供了细胞非裂解缓冲液和反应底物，分裂酶大片段需由客户自行准备。
1．在96孔或384孔细胞培养板铺合适密度的待检测细胞，转染合适的质粒或带有分裂酶荧光素小片段标签的目标蛋白表达载体的稳定细胞株（建议使用白板）。 2．根据实验需求对细胞进行相关处理，并继续培养合适的时间。 3．取出检测缓冲液，在室温平衡20分钟。快速瞬时离心底物管10秒钟，将内容物收集于管底，放置在冰盒上。4．取出待测细胞培养板，在室温下平衡20分钟。 5．准备1x检测试剂：根据实验需求确定配制的试剂量。配制时将需要的底物及分裂酶大片段按量比加到缓冲液中，充分混匀。请注意避光。本试剂盒中，底物是100×，建议客户准备50×的分裂酶大片段，使用前用缓冲液稀释成的检测工作液。Note：分裂酶大片段需由客户自行准备，最佳浓度需要优化。 6．加等体积 1×的检测工作液到 96 或 384 孔板细胞中，轻轻振荡 30 秒钟。 7．在luminescence读板仪上读取荧光信号。保存数据，进行数据处理分析。 2Note：建议在5-30分钟内完成读板以获得最佳结果。 8．未使用完的试剂放回-20℃冰箱保存。
试验中请穿着试验服并带手套做好防护工作。请按实验室安全操作规范进行实验。本试剂仅供科研使用，请勿用于临床诊断或其他治疗用途。
产品性能
存放说明/保质期
Neo-Glo® 微分裂荧光素酶检测试剂盒（胞外型）于-20℃或以下储存。避免冻融次数超过3次以上。加了底物的裂解缓冲液可于4℃保存不超过2小时。检测工作液需要现配现用。
